第135章 黎明前的测序
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徐文培从书房的椅子上站了起来。
他道：
“绕过地方疾控，直接走加急测序通道，得是国家级的公共卫生警报，不可能只凭几个重症病例就越级上报。”
江河迅速匯报：
“患者42岁，既往体健，在48小时內从普通发热进展为双肺大面积实变，血氧跌破88%，更重要的是，接触过他的翻译现在在省人民医院插管，负责打扫他房间的保洁在市八医院昏迷，常规的甲流快筛是阳性，但大剂量的奥司他韦用下去毫无反应。”
徐文培沉默。
过了会，又问：“你確认过流行病学链条吗？”
“嗯，他们在三天內都有明確的时空交集点，现在常规的流程需要市级、省级疾控逐级分离培养，最快也要两到三周才能出全基因组序列，三周时间，广交会数万外商和本地人口足够把这个病毒带到全国甚至全世界。”
江河顿了顿，道：“我只需要您帮我联繫病毒病所的核心研究员，把通道打通，证据，我今晚自己做出来发给他们。”
“你自己做？”徐文培眉头紧锁，“你去哪弄p3实验室和测序仪？”
“这个我来解决，只要拿到关键靶点的突变基因序列，我就直接通过邮件发您，有了序列对比，流程就能合法合规提速。”
徐文培站在窗前，无言思量著。
於他而言，一个大三学生，哪怕发了顶刊，但在大流行传染病面前，依然显得过於年轻。
但……江河的忙，自己必须得帮。
“好，我认识病毒病所的舒跃龙研究员，人不错，如果你能拿出证明它不是季节性流感的测序片段，我就有信心说服他让他直接介入。”
“好的，谢谢徐主任。”
掛断电话，江河转身走回医务科办公室。
杨煦和柯正还在等他。
江河：“老师，我想借用孙长明教授的肿瘤研究所中心实验室，全院只有那里有abi 3130xl基因分析仪和高標准的生物安全柜，还有，我需要柯医生立刻去给马克做一次深部支气管肺泡灌洗，把灌洗液样本交给我。”
杨煦看著江河，他意识到自己的学生要干什么了。
隨之，惊讶的无以復加。
柯正又震惊又担忧，道：“你要自己做核酸提取和基因测序？可你只是个学生啊，如果在实验室里发生泄露或者暴露怎么办？这违规了吧？”
“所以样本需要柯医生在病房里加入含有硫氰酸胍的裂解液，硫氰酸胍会瞬间使病毒的蛋白质外壳变性，彻底灭活病毒，同时抑制rna酶的活性。”
江河道：“灭活后的样本送到实验室，就不再具备传染性，实验室里的操作只需要常规的生物安全防护级別就足够了，这在流程上没有违规。”
柯正被江河严密的逻辑堵得说不出话来。
杨煦终於从惊讶中缓过神来。
今天晚上，全程开启自动跟隨的他，又被自己学生震撼到了。
於是便不再犹豫，站起身，拨通了孙长明的电话。
凌晨两点，电话响了很久才被接起。
孙长明：“老杨？干什么？怕我跟你抢媳妇，也不能不让我睡觉吧？”
杨煦：“长明，借你的中心实验室用一晚，pcr仪、离心机、通风橱、还有abi测序仪，包括冷库里的试剂盒，我全都要用。”
孙长明清醒了些：“你个搞肝胆外科的用什么测序仪？你要干嘛？”
“江河要用。”杨煦说。
电话那头沉默了两秒。
隨后，孙长明龙顏大悦：“你同意让江河加入我的实验室了？孺子可教也……”
杨煦：“別开玩笑了，正事。”
“呃……正事吗？抱歉。”
如果是別人，孙长明肯定还要多问几句。
但要借设备的人是江河，孙长明就没多问了。
“……行，我给值班的安保打电话开门，仪器隨便用，试剂用多少记下来，让他以后从自己的项目经费里扣。”
“谢了。”杨煦掛断电话，“实验室搞定了，但提取病毒rna和跑pcr是个精细活，一个人一晚上不可能做的完。”
“对，所以我准备叫人。”
江河拿出手机，点开mirna早筛项目组的群聊。
凌晨2:10。
江河：【所有人，看到消息立刻回復，半小时內，附一院孙长明教授肿瘤研究所中心实验室门口集合。】
消息发出去不到三十秒。
陈浩：【收到！我来给所有人打电话！】
程溪瑶：【已经在穿衣服了。】
顾亦舟：【我离得近，五分钟到。】
陆晓林：【收到。】
没有人问为什么，没有人抱怨现在是凌晨两点。
二十分钟后，肿瘤研究所中心实验室大门外。
陈浩连扣子都扣错了，程溪瑶的头髮隨便用皮筋扎在脑后。
江河站在实验室门口等他们。
陈浩问：“老江，大半夜的，出什么事了？嫂子呢？”
江河简单回答：“你嫂子在酒店，附一院有紧急情况，我们要连夜做个研究。”
“啊？”程溪瑶一愣，“嫂子来了？”
“这不是重点吧！”易向晚有些紧张道，“原来是紧急情况吗？可是老大，咱都是新手啊？你怎么不去找附一院检验科的人？”
答案很简单。
检验科的老师们有自己的操作习惯。
如果江河去指挥他们，他们会质疑为什么不加这个试剂，为什么要改那个参数。
沟通成本极高。
但这六个人不同。
过去的一段时间里，江河给他们进行了地狱般的rna提取理论授课。
他们对江河的话言听计从，执行江河的作业程序不会有任何折扣。
所以，江河道：“听好，医院收治了一例极高危的不明原因重症肺炎患者，现在我怀疑是一种新型的重组流感病毒，我们需要在今晚，提取出病毒的rna，逆转录成a，跑出pcr扩增片段，然后上机测序，拿到它的基因序列证明。”
六个人：“？？？”
唐培：“老，老大……这什么未知病毒的，我们做……安全吗？”
“送来的样本是经过硫氰酸胍彻底裂解灭活的，它现在只是一堆核酸物质，没有传染性，这和我们前几天培训的提取外周血游离mirna的底层逻辑完全一致，甚至因为我们要提取的是病毒的基因组rna，丰度更高，操作上反而更容易。”
“重点是，防止环境里的rna酶降解样本。”
江河严肃道：“你们是我亲自教出来的，我对你们的实验规范有绝对的信心，今晚的操作，每一步都必须严格按照我教的规范来，不许有任何多余的动作，听明白了吗？”
“明白！”陆晓林年纪最长，第一个出声回应。
“明白了老江，你说咋干就咋干。”陈浩拍了拍脸，让自己彻底清醒。
“去更衣室，穿两层隔离衣，戴双层乳胶手套，n95口罩，护目镜，进核心区。”
凌晨3:15。
柯正提著一个密封的生物安全转运箱来到了实验室门口。
他把箱子交给江河：“江河，这是马克的深部支气管肺泡灌洗液，已经加了裂解液灭活了。”
“好。”
江河接过箱子，转身刷卡进入实验室核心区，立刻说道：
“第一组，陈浩、向晚，你们负责配製试剂，所有的depc水、无水乙醇、异丙醇，全部重新开封新的，確保绝对无rna酶污染，操作台用rnasezap喷洒擦拭两遍。”
“第二组，程溪瑶、唐培，你们负责给所有的移液枪换上带滤芯的枪头，准备好离心管和冰盒。”
“师兄，亦舟，你们俩配合我，准备过柱子提取。”
江河站在超净工作檯前，將转运箱打开，取出装有灭活样本的冻存管。
“开始。”
实验室內。
严肃，高效。
这群年纪轻轻的学生，此刻展现出了惊人的纪律性。
这就是培训的成果！
江河拿起一把p1000的移液枪，套上带滤芯的枪头。
“加入trizol试剂，1毫升。”
將样本移入新的离心管中，注入trizol。
透明的液体瞬间混合。
“室温静置5分钟，让核蛋白复合体彻底解离。”
江河看了一眼墙上的掛钟。
五分钟一到。
“加氯仿，0.2毫升。”
“盖紧管盖，剧烈振盪15秒。”
“静置3分钟。”
顾亦舟在一旁已经打开了高速冷冻离心机的盖子，温度已经预冷到了4c。
“放入离心机，配平，12000转，15分钟。”
这15分钟极其漫长。
“滴——”
离心机停止。
江河小心翼翼取出离心管。
在冷光的照射下，管內的液体清晰地分成了三层：
底层是红色的酚氯仿相，中间是一层薄薄的白色蛋白交界面，最上层是无色的水相。
所有的病毒rna，都溶解在这最上层的无色水相中。
江河深吸了一口气，换了一把p200的移液枪。
这一步是整个提取过程中最关键的一步。
如果吸到了中间的蛋白层或者底层的有机相，整个样本就废了。
他將手肘支撑在檯面上，按下移液枪的按钮。
枪尖精准悬停在无色水相的中央，缓缓吸取了400微升的液体，移入一个全新的无酶离心管中。
全程，江河的手没有一丝颤抖。
外科医生的定力，在这一刻展现得淋漓尽致。
陆晓林在旁边看得头皮发麻。
——哪怕是浸淫实验室多年的老研究员，悬空吸取水相时也难免会有细微的晃动，但江河的手就像是被焊死了一样，稳得可怕。
“加入等体积的异丙醇，陈浩，递冰盒。”